1 高效液相色譜儀系統(tǒng) 
　液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數據處理系統(tǒng)組成。對于整個系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位。 
2 常見問題及解決方法 
　高效液相作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導致一些問題。其中常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題。 
1.柱壓問題 柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI（3.3 Bar）之間（在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的）。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。 

　 壓力過高：這是高效液相在使用中常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。 

(1) .首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查； 
(2).打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下，過濾白頭正常，在檢查； 
(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。  
   壓力過低：壓力過低的現象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個原因就是泵里進了空氣，但此時表現的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。 
2.漂移問題 主要包括基線漂移和保留時間漂移。 
 2.2.1基線漂移一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下（220nm）平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發(fā)現基線漂移，則你要考慮下面的原因： 

1、柱溫波動。解決方法：控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。  　

2、流通池被污染或有氣體。 解決方法：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池（hao斷開柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。 

3、紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈 
4、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。解決方法：檢查流動相的組成，使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。 

5、樣品中有強保留的物質（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。解決方法：使用保護柱，如有必要，在進樣之間。在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。 
6、檢測器沒有設定在大吸收波長處。解決方法：將波長調整至大吸收波長處 
7、流動相的PH值沒有調節(jié)好。解決方法：加適量的酸或堿調至haoPH值 
二、.

保留時間漂移保留時間重現是液相性能好壞的一個重要標志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移，就無法進行定性，你要考慮以下原因： 
1、溫控不當。解決方法：調好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。 
2、流動相比例變化。解決方法：檢查四元泵的比例閥是否有故障 
3、色譜柱沒有平衡。解決方法：在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱 
4、流速變化。解決方法：重新設定流速 
5、泵中有氣泡。解決方法：、從泵中除去氣泡 
  2.3 峰型異常問題 峰型問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā)，一個一個加以解決。  
1、色譜圖中未出峰。解決方法：系統(tǒng)未進樣或樣品分解；泵未輸液或流動相使用不正確；檢測器設置不正確；針對以上情況成因作相應調整即可。 
2、 一個峰或幾個峰是負峰。解決方法：流動相吸收本底高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。 
3、 所有峰均為負峰。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光學裝置尚未達到平衡。 
4、所有峰均為寬峰。解決方法：系統(tǒng)未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。 、 
5、所出峰比預想的小。解決方法：樣品黏度過大；進樣品故障或進樣體積誤差；檢測器設置不正確．定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問題。 
6、出現雙峰或肩峰。解決方法：進樣量過大；樣品濃度過高；保護柱或色譜柱柱頭堵塞；保護拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。 
7、前伸峰。解決方法：進樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動相極性強；保護柱或色譜柱污染或失效。 
8、拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對樣品進行清潔過濾；調整流動相；硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值；柱內燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼；加在線過濾器，對樣品進行過濾；死體積或柱外體積過大，將連接點降至低；盡可能使用內徑較細的連接管；柱效下降，更換柱子；采用保護柱，對柱子進行再生。 
9、出現平頭峰。解決方法：檢測器設置不正確；進樣體積太大或樣品濃度太高。 
10、出現鬼峰。解決方法：進樣閥殘余峰，在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng)；樣品中存在未知物，改進樣品的預處理；流動相污染，更換新流動相，盡可能現配現用，隔夜的流動相再次使用時要過濾；盡可能使用HPLC級試劑；流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。 

3 結語 

以上內容只是對液相色譜中出現的常見的問題進行了分析，在故障排除時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，確定假定因素與問題之間的聯(lián)系；如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費；這是成功進行故障排除的關鍵?？傊谑褂酶咝б合嗌V時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)。